2010年9月10日星期五

孕妇外周血中的胎儿细胞和DNA


很早人们就发现,胎儿的细胞可以进入母体循环中,并 在母体外周血中检测出来。由于人们在不断寻找无创性的检测手段来进行产前诊断,孕妇外周血中胎儿细胞的检测便受到了重视。近年来,随着分子生物学技术和胎 儿细胞分离富集技术的研究进展,可以从孕妇外周血中得到一定比例的胎儿细胞应用于某些基因病诊断。这也为其在法医学相关领域的应用提供了可能性。现就该技 术的发展及法庭应用前景综述如下:
    早在十九世纪末,德国科学家就在死于子痫的孕妇肺组织中发现过滋养细胞。但直到1979年,Herzenberg[ 1] 才首次应用荧光活化细胞拣选法,在孕15周的HLA-A2阴性孕妇(丈夫为HLA-A2阳性)的外周血中富集出HLA-A2阳性细胞,并用Y染色体荧光标记检测进行了分析,认为这些细胞来源于胎儿。1989Lo[ 2]首次应用巢式PCR技术在孕妇外周血中扩增出Y特异性重复序列,并提出这一技术可以作为性相关基因疾病的产前诊断方法。之后,许多研究都证实了孕妇外周血中存在胎儿细胞和DNA
    随着胎儿特异性单克隆抗体的不断出现和细胞分离技术的发展,人们从孕妇外周血中主要发现了三种胎儿细胞:

    滋养细胞(trophoblasts):Covone[ 3 ]应用抗H315单克隆抗体,从孕6周及其他孕期的母体外周血中分离出了三类滋养细胞(多核、双核及来自合体滋养层的无核细胞)。近年,单克隆抗体340也被成功地用于辨认和分离滋养细胞[ 4]。由于在孕第9天形成滋养层细胞的过程就开始了,因而,滋养细胞是胎儿早进入母体循环的细胞;
    淋巴细胞(lymphocytes):淋巴细胞在母体外周血中出现较晚,但存活时间可长达分娩后6个月~27[ 5],下次妊娠时可再次出现,故被认为不太适合于诊断或鉴定;
有核红细胞(nucleated red blood cellNRBC):有核红细胞在成人血循环中罕见,而在胎儿循环中普遍存在,特别是早孕期,11周时达10%19周时为0.5%;它有独特的抗原成分,如转铁蛋白受体(CD71)、血型糖蛋白AGPA)等可被用来分离富集胎儿细胞;其存活寿命短,一般不超过90天,不至于影响下次妊娠的诊断。因此,有核红细胞被认为是较适于诊断的胎儿细胞。Simpson等用流量细胞计数器分析获得的数据,胎儿有核红细胞与母体外周血中的有核细胞之比是1107~108Hall等应用免疫纯化方法(抗CD34)估计,该比例为14.75×106~16×107[6] 。可见,胎儿细胞在母体外周血中的数量很少。

    在母体外周血的血浆中也可以检测到胎儿的DNA[7]。有学者认为,母体血浆中存在游离胎儿DNA,是因为胎儿对母体就如同肿瘤对机体一样,肿瘤DNA可以在血浆中检测到,那么母体对胎儿也会有免疫排斥反应,是胎儿细胞破裂将DNA释放到母体血浆中所致。





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